液氮罐中细胞的安全取出与复苏操作指南

从液氮罐中取出冷冻的细胞，是细胞培养和生物样本库管理中的一项关键操作。这个过程看似简单，但其中蕴含着巨大的风险：既关乎操作者的人身安全（冻伤、窒息），也关系到珍贵细胞样本的存亡（交叉污染、活性降低）。遵循标准流程是确保人与样本安全的前提。

一、操作前的核心准备

1. 个人安全防护：
这是不可妥协的第一步。液氮的温度低至-196℃，接触皮肤会造成严重冻伤。

• 防冻手套：必须佩戴宽松、保暖的专用低温手套，切勿使用湿手套。

• 护目镜：全程佩戴，防止液氮飞溅入眼。

• 实验服：穿好长袖实验服和封闭的鞋子，避免皮肤暴露。

• 长裤：确保穿着长裤，保护腿部。

2. 环境与设备准备：

• 通风良好：确保操作区域空气流通，避免液氮挥发导致局部空间氧气含量过低，引起窒息风险。

• 检查装备：

• 长柄镊子：用于夹取细小的冻存管。

• 提篮手柄：确保与罐内提篮的连接处完好。

• 专用转移容器：准备好一个足够深的杜瓦罐或小型液氮罐，用于临时放置取出的提篮和样本，防止样本在空气中升温。

• 规划与识别：提前确认好目标细胞样本在液氮罐中的具体位置（例如，第X号提篮，第Y行第Z列），做到“快、准、稳”，尽量减少罐口的开启时间。

二、取出流程：规范操作是关键

1. 开启罐盖：

• 平稳地移除液氮罐的颈塞和盖盖。动作轻柔，避免大幅度搅动。

2. 提取提篮：

• 将提篮手柄牢固地连接到目标提篮的挂钩上。

• 平稳而迅速地将提篮从液氮中提升至罐口附近。此时，整个提篮和样本都处于超低温状态，会剧烈地沸腾和喷溅液氮，属正常现象，保持冷静。

• 切勿将提篮完全提出罐口，应使其大部分体积仍处于罐颈的冷气区中。

3. 定位并夹取目标冻存管：

• 在罐口冷气区内，快速用长柄镊子在提篮中寻找目标冻存管。

• 夹取时，最好夹住冻存管的盖子上部，避免夹管身，以防损坏或导致管盖意外开启。

• 夹取动作要稳，防止碰到其他样本，造成交叉污染或标识脱落。

4. 快速转移与复查：

• 一旦夹住目标冻存管，立即将其转移至准备好的、预冷过的专用转移容器（杜瓦罐） 中。这个过程在空气中的暴露时间应控制在几秒钟之内。

• 如果需要取出多个样本，建议分批操作，每次只取一个，并立即放回转移容器，不要将所有样本都长时间暴露在空气中。

• 取出所有目标样本后，迅速、平稳地将提篮放回液氮罐中原有的位置。

• 立即盖好罐盖和颈塞，恢复液氮罐的密封保温状态。

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三、核心安全原则与常见误区

1. 安全原则：

• “三防”原则：

• 防冻伤：任何时候身体都不要接触液氮、冻存管金属部分或提篮。

• 防爆炸：这是最重要的一点！如果冻存管在液氮中浸泡时密封不严，液氮可能渗入管内。取出后，管内液氮受热急剧气化，体积膨胀约680倍，会产生巨大压力，可能导致冻存管爆炸（喷出管盖或管体破裂）。因此，操作时务必佩戴好护目镜和面罩，并将冻存管始终置于防护盖后面。

• 防窒息：保证通风。

• 速度原则：整个操作过程要“稳中求快”，最大限度地减少样本在室温下的暴露时间。温度的剧烈波动会严重损害细胞活性。

2. 常见误区与禁忌：

• 禁忌：直接用手取管。皮肤会瞬间粘在超低温的金属或塑料上，造成撕裂性冻伤。

• 禁忌：将取出的样本长时间放在桌面上。细胞冻存液中的DMSO在较高温度下对细胞有毒性，缓慢升温会显著降低细胞复苏的存活率。

• 禁忌：在液氮罐正上方操作。防止液氮滴落或冻存管爆炸时伤及面部。

• 禁忌：让提篮完全离开罐口长时间寻找样本。这会导致提篮内所有样本升温，影响其他细胞的保存质量。

四、取出的后续步骤：细胞复苏

取出冻存管仅仅是第一步，接下来需要进行规范的细胞复苏：

1. 从转移容器中取出目标冻存管，立即放入37℃的恒温水浴锅中，并不断摇晃，使其在1-2分钟内完全解冻。

2. 解冻后，用酒精彻底消毒冻存管外壁。

3. 将细胞悬液转移至含有预温培养基的培养器皿中，进行后续培养。

总结
从液氮罐中取出细胞是一项严谨的技术工作。成功的标准不仅是拿到了样本，更是确保了操作者的绝对安全，并最大限度地保持了细胞的高活性和无污染状态。牢记防护、迅速、规范三大要点，是顺利完成这项工作的根本保障。