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冻存管灭菌后出现污染或破损？通用灭菌技术
时间:2025-11-10 09:27来源:原创 作者:小编 点击:
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一、冻存管灭菌常见问题及影响
冻存管作为样本储存的核心载体，灭菌环节直接关系到样本完整性和实验准确性。实际使用中，常出现灭菌后污染、管体变形开裂、密封性下降等问题，可能导致样本交叉污染、活性丧失，甚至影响实验数据可靠性。这些问题多与灭菌方式选择不当、操作流程不规范、材质适配性忽略等因素相关，因此掌握科学的灭菌方法尤为重要。
二、冻存管通用灭菌方式及操作要点
（一）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
这是实验室最常用的灭菌方式，适用于可耐受高温高压的聚丙烯（PP）、聚碳酸酯（PC）材质冻存管，灭菌原理为高温蒸汽穿透杀灭微生物。
- 操作流程：
- 灭菌前：将清洗干净的冻存管（开盖状态）放入灭菌篮，避免堆叠过密，确保蒸汽流通；加入适量去离子水，水位符合灭菌锅要求。
- 灭菌参数：温度 121℃、压力 103.4kPa，持续 15-30 分钟（根据冻存管规格调整，常规 1.8mL/2mL 管建议 20 分钟）。
- 灭菌后：自然降压至常压，待温度降至 80℃以下再开盖，避免骤冷导致管体破损；取出后在无菌环境中晾干，密封保存。
- 注意事项：不可用于含有橡胶密封圈的冻存管（高温可能导致密封圈老化）；避免灭菌后立即密封，防止管内残留水汽滋生细菌。
（二）干热灭菌
适用于耐高温但不耐潮湿的冻存管或配件，如玻璃冻存管、金属盖冻存管，通过干热空气实现灭菌。
- 操作流程：
- 预处理：冻存管清洗后彻底干燥，避免水分影响灭菌效果；开盖放入灭菌箱，保持间距。
- 灭菌参数：温度 160-170℃，持续 2-4 小时；若温度提升至 180℃，可缩短至 30 分钟（需确认冻存管材质耐受温度）。
- 冷却与保存：灭菌完成后关闭电源，自然冷却至室温再取出，禁止中途开门（温差过大易导致玻璃管破裂）；无菌环境下密封。
- 注意事项：聚丙烯材质冻存管不耐干热高温（通常耐受温度≤121℃），不可采用此方式；灭菌过程中避免放入易挥发、易燃物品。
（三）辐照灭菌
适用于一次性使用的预灭菌冻存管，或需批量灭菌的场景，常用 γ
射线、电子束辐照，具有灭菌彻底、无残留的特点。
- 操作要点：
- 选择合规的辐照灭菌服务，确保辐照剂量在 25-50 kGy（符合 ISO 11137 灭菌标准）。
- 冻存管需密封包装后辐照，避免灭菌后二次污染；辐照后检查包装完整性，无破损方可使用。
- 适用场景：无需自行操作，适合对灭菌效率要求高、避免实验室污染的场景；注意辐照后的冻存管需在规定有效期内使用。
三、灭菌效果验证与质量把控
- 无菌验证：定期抽取灭菌后的冻存管，放入无菌培养基中培养 24-48 小时（37℃），观察是否有菌落生长，确保灭菌合格率。
- 密封性测试：灭菌后将冻存管装满去离子水，密封后倒置 12 小时，检查是否漏水，避免因灭菌导致密封性能下降。
材质检查：每次灭菌后观察冻存管外观，若出现变形、变色、裂纹等情况，需排查灭菌参数是否超标或材质是否适配。
四、关键注意事项
- 材质适配：灭菌前确认冻存管材质，聚丙烯（PP）冻存管优先选湿热灭菌，玻璃材质可选用干热灭菌，避免材质与灭菌方式不匹配导致损坏。
- 清洁预处理：灭菌前必须彻底清洗冻存管，去除残留样本、灰尘等污染物，否则会影响灭菌穿透性，导致灭菌不彻底。
- 无菌环境：灭菌后操作需在超净工作台等无菌环境中进行，避免晾干、密封过程中引入污染物。
- 避免重复灭菌：多数冻存管仅可耐受 1-3 次湿热 / 干热灭菌，重复灭菌会导致材质老化、密封性下降，建议根据使用需求控制灭菌次数。
