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液氮罐灭菌不彻底致样本污染？科学灭菌方法
时间:2025-11-10 10:21来源:原创 作者:小编 点击:
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一、液氮罐灭菌不当的常见问题及影响
液氮罐作为低温样本存储核心设备，若灭菌不彻底或方式不当，易引发系列问题：部分实验室因罐内残留微生物（如细菌、真菌），导致存储的细胞、组织样本交叉污染，实验数据失真；也有用户因选用腐蚀性灭菌剂，造成罐体内胆不锈钢材质氧化生锈，缩短设备使用寿命；还有操作中忽略密封盖、提筒等部件灭菌，导致这些高频接触部位成为微生物滋生源，反复污染样本。此外，若灭菌后未彻底干燥，罐内残留水分遇低温结冰，可能损坏内部存储架或影响密封性能。这些问题的根源在于缺乏系统的灭菌流程与对设备材质特性的认知，因此掌握科学灭菌方法尤为关键。
二、灭菌前的清洁预处理
灭菌前的彻底清洁是保障灭菌效果的基础，需按 “拆解 - 分部件清洁”
原则操作：
- 拆解部件：先清空罐内液氮与样本，待罐身恢复至室温（避免低温下清洁液结冰），拆解可分离部件，如提筒、存储架、密封盖、泄压阀滤芯（若有），单独清洁避免盲区。
- 内胆清洁：用软布蘸取中性清洁剂（如医用洗洁精稀释液，浓度 1%-2%），轻轻擦拭罐体内胆，重点清洁底部角落与提筒导轨缝隙，去除残留样本碎屑与油污；禁用硬毛刷或钢丝球，防止划伤内胆不锈钢表面，滋生微生物。
- 小部件清洁：提筒、存储架可浸泡在中性清洁液中 30 分钟，用软毛刷清理缝隙；密封盖（含橡胶密封圈）需单独用清水擦拭，避免清洁剂残留腐蚀密封圈，影响密封性；泄压阀滤芯若为可清洗类型，用清水冲洗后晾干，不可清洗的则需更换新滤芯。
- 冲洗与沥干：所有部件清洁后，用去离子水或纯化水彻底冲洗 2-3 次，去除清洁剂残留；将部件倒置在无菌操作台上，自然沥干至表面无水分（约 2-4 小时，视环境湿度而定），避免带水进入灭菌环节。
三、常用灭菌方式及操作要点
需根据液氮罐部件材质与功能，选择适配的灭菌方式，避免损坏设备：
（一）湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）
适用部件：罐体内胆（不含密封件）、提筒、金属存储架等耐高温高压的金属部件，灭菌原理为高温蒸汽穿透杀灭微生物。
- 操作步骤：
- 将沥干的金属部件放入灭菌篮，避免堆叠过密，确保蒸汽流通；灭菌锅内加入足量去离子水，水位符合设备要求。
- 设置灭菌参数：温度 121℃、压力 103.4kPa，持续 15-20 分钟（提筒等小部件 15 分钟，内胆若可拆卸则 20 分钟）。
- 灭菌后自然降压至常压，待温度降至 80℃以下再开盖，防止骤冷导致金属部件变形；取出部件后在超净工作台内晾干，避免二次污染。
- 注意事项：橡胶密封圈、塑料材质部件（如部分泄压阀外壳）不可用此方式，高温会导致密封圈老化、塑料变形。
（二）干热灭菌
适用部件：金属提筒、存储架，以及无法拆卸的小型金属附件，适合不耐潮湿但耐高温的部件。
- 操作步骤：
- 部件彻底晾干后放入干热灭菌箱，保持间距 5-10cm，避免遮挡热空气流通。
- 设置参数：温度 160-170℃，持续 2-3 小时（温度 180℃时可缩短至 30 分钟，但需确认部件材质耐受温度，常规不锈钢部件耐受温度≤180℃）。
- 灭菌后关闭电源，自然冷却至室温再取出，禁止中途开门，防止温差过大导致部件开裂。
- 注意事项：罐体内胆若不可拆卸，不建议用干热灭菌，高温可能影响罐身真空绝热层性能。
（三）化学灭菌
适用部件：罐身外部、密封盖（含橡胶密封圈）、泄压阀外壳等不耐高温的部件，常用 75%
医用乙醇（酒精）作为灭菌剂，兼具杀菌效果与低腐蚀性。
- 操作步骤：
- 用无菌纱布蘸取 75% 乙醇，均匀擦拭罐身外部、密封盖内外表面及泄压阀外壳，重点清洁提手、开关等高频接触部位。
- 擦拭后静置 5-10 分钟，让乙醇充分挥发，避免残留乙醇接触液氮后产生危险；橡胶密封圈擦拭后需检查是否有变形，若出现硬化需及时更换。
- 注意事项：禁用含氯消毒剂（如 84 消毒液）或强酸强碱类灭菌剂，防止腐蚀罐身涂层与橡胶部件；不可用乙醇直接擦拭罐体内胆，避免残留乙醇污染样本。
四、灭菌效果验证与质量检查
灭菌后需通过多重验证，确保设备可用且灭菌有效：
- 无菌检测：取灭菌后的提筒或存储架，用无菌棉签擦拭表面，将棉签放入无菌营养琼脂培养基中，37℃培养 24-48 小时，观察是否有菌落生长，无菌落则灭菌合格。
- 密封性测试：将灭菌后的液氮罐组装完整，加入少量液氮（约 1/3 容量），密封后静置 24 小时，观察罐身是否有异常结霜（正常情况下仅罐口轻微结霜），若罐身中部或底部结霜，说明密封性受损，需检查密封圈或真空层。
- 外观检查：观察所有部件是否有变形、变色、腐蚀痕迹，如金属部件出现锈斑、塑料部件开裂，需更换受损部件后再使用。
五、灭菌操作的关键注意事项
- 部件适配原则：明确各部件材质特性，金属部件优先选湿热或干热灭菌，橡胶、塑料部件选化学灭菌，避免 “一刀切” 式灭菌导致设备损坏。
- 避免过度灭菌：同一部件累计灭菌次数建议不超过 5 次，反复高温灭菌会导致金属部件疲劳变形、橡胶密封圈老化，影响设备使用寿命。
- 安全防护：操作湿热 / 干热灭菌时，佩戴耐高温手套与护目镜，防止蒸汽烫伤；使用乙醇灭菌时，远离火源与高温设备，避免乙醇挥发引发火灾。
- 灭菌后干燥：所有部件灭菌后必须彻底干燥，尤其是罐体内胆，残留水分在低温下会结冰膨胀，可能挤压存储架或损坏内胆。
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