当前位置:首页 > 行业动态 > / 不同复温方法对液氮保存人同种瓣活性影响的实验研究

不同复温方法对液氮保存人同种瓣活性影响的实验研究

时间:2020-06-18 10:06来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:

目的:寻找一种能最大程度保持液氮贮存人同种主动脉瓣活性的复温方法。自增压液氮罐
方法:同种主动脉瓣(n=36)随机分为6组,Ⅰ组为新鲜同种主动脉瓣,Ⅱ~Ⅵ组经液氮保存3月后,分别采用①42℃水浴复温(Ⅱ组),②(1.0±0.2)℃/min(Ⅲ组),③(4.0±0.5)℃/min(Ⅳ组),④(10.0±2.0)℃/min(Ⅴ组);⑤(30.0±4.5)℃/min(Ⅵ组)。将同种主动脉瓣复温至4℃,对所有同种主动脉瓣进行台盼蓝染色活细胞计数、24小时葡萄糖代谢率测定,氚化胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)参入、瓣膜组织培养。
结果:上述指标Ⅰ组显著优于其余各组(P<0.05),Ⅳ组优于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组(P<0.05)。组织培养Ⅰ组细胞生长优于其余各组,且早于各组3~4天。
结论:不同复温方法对同种主动脉瓣活性影响不同,以4℃/min匀速复温法对同种主动脉瓣活性影响最轻。

关键词:同种 主动脉瓣 活性

  我们通过本研究观察不同复温方法对同种瓣活性的影响,旨在寻找一种能较好保持同种瓣活性的复温方法,为临床合理应用同种瓣提供依据,现报道如下。

材料与方法
  1.取材分组 于1995年10月~1996年5月选择46例健康成人脑死亡者,于死亡30分钟内,在无菌条件下取出心脏,随机抽取36例(年龄20岁~32岁,平均26岁)分为6组(n=36)。4℃生理盐水
冲洗、修剪,保留主动脉瓣,插入铜-康铜热电偶测量电极,将同种瓣置入含万古霉素(50mg/L)、二性霉素(25mg/L)的RPMI1640液,经4℃过渡2小时后移入液氮气相中放置2小时,然后置入液氮中,保存3月后取出,分别以①42℃水浴复温(Ⅱ组);②(1.0±0.2)℃/min(Ⅲ组);③(4.0±0.5)℃/min(Ⅳ组);④(10.0±2.0)/min(Ⅴ组);⑤(30.0±4.5)℃/min(Ⅵ组)的速率将同种瓣复温至4℃,新鲜未冷冻同种瓣对照(Ⅰ组)。
  2.温度测量控制装置与方法 根据升降式降温仪原理,自制复温装置,如图1所示。

图1 升降式温度测量控制装置
1 液氮容器 2 铜-康铜热电偶
3 同种瓣保存袋 4 液氮 5 旋转升降器 6 冰瓶
7 植物油 8 标准探极 9 冰水 10 数字式万用电表

  3.测量探极置于同种瓣叶内,标准探极插入冰水瓶,测量两探极之间电势差,依公式与摄氏温度换算。根据复温速度要求,将含有同种瓣材料的托盘,通过细绳由旋转升降器牵引上升,利用万用电表显示电势差,控制升降速率。换算公式:U=0.0385t+0.00004t2-5.4295×10-8t3,其中U为电势差值(单位:mV),t为摄氏温度值(单位:℃)。
  4.实验方法 ①台盼蓝染色法:0.25%胰酶消化剪碎的主动脉瓣叶,270目纤维滤膜过滤,滤液1200转/分离心15分钟,弃上清液,按1∶1将5%台盼蓝加入细胞悬液,光学显微镜计数。②葡萄糖代谢率测定:每10mg瓣膜组织中加入RPMI1640液1ml,在37℃、5%CO2孵箱中孵育24小时后用自动生化分析仪作葡萄糖定量测定。代谢率[mmol/(mg.24h)]其中RPMI1640液原液同条件下葡萄糖定量为11.3mmol/L。③氚化胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)参入量:瓣叶组织在孵育中加入3H-TdR 2μci,24小时后取出瓣叶,经漂洗后加入2mol/L NaOH,加热将其溶解,加入闪烁液10ml,用自动液闪计数仪计数(CPM)。3H-TdR参入量[CMP/(mg.24h)]=,其中RPMI1640原液本底为27CPM。④组织培养:以组织块贴壁方法在37℃、5%CO2孵箱中RPMI1640培养液培养,每周换液2次,每次半量,待组织块周边有细胞长出后,拍照。
  5.统计学方法 台盼蓝染色活细胞百分率行组间χ2检验,葡萄糖代谢率及3H-TdR参入量以Image12.gif (851 bytes)±s表示,行组间t检验,P<0.05差异有显著意义。

结 果
  台盼蓝拒染细胞百分率、葡萄糖代谢率及3H-TdR参入量结果见表1。表1显示:Ⅱ~Ⅵ组活细胞百分率(主要为内皮细胞)显著低于Ⅰ组(P<0.05);而Ⅳ组又显著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组(P<0.05);Ⅰ组葡萄糖代谢率、3H-TdR参入量显著高于其它各组(P<0.05),Ⅳ组又显著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组(P<0.05)。组织培养Ⅰ组细胞生长优于其余各组,且早3~4天。Ⅱ~Ⅵ组培养,Ⅳ组细胞生长优于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组。

讨 论
  同种瓣形态结构的完整决定着其耐久性。瓣膜冷冻保存不同于单细胞,由于细胞成分多样,细胞间质存在,在复温过程中,使热量交换不均匀,外周组织内冰晶融化可从内部吸收热量,使内部组织再结晶加重,可造成细胞严重的机械性损伤。另外,低温蛋白质的变性,脂质的丢失,细胞膜通透性的改变以及细胞膜上小孔的形成,使水分子易通过细胞膜,引起细胞内水负荷加重,超过一定时间或程度时,细胞便会破裂。本研究结果发现,不同复温速率对液氮保存的同种瓣均有损害。临床上常用的42℃水浴复温法,其复温速率不均匀,细胞损害重,活性低,可能与细胞再结晶重,高水负荷状态持续时间长有关。30℃/min和10℃/min复温,温差大,细胞内再结晶重。1℃/min复温,虽然再结晶轻,但细胞内高水负荷持续时间长,细胞损害亦重。4℃/min复温方法较好地保持了细胞活性,可能与热交换时间充裕,再结晶轻,细胞内高水负荷状态未超临界值有关。自增压液氮罐

相关内容

收缩
  • 电话咨询

  • 15611258074
  • 微信咨询