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气相液氮运输罐短期储存胚胎的可行性研究材料和方法（下）
时间:2019-05-21 13:35来源: 作者:班德液氮罐 点击:
次
1．6胚胎冷冻 自增压液氮罐
采用玻璃化冷冻的方法。先将l mol／L的DMso在宝温下平衡，DAP2 1 3和冷冻管(NuncCryoTllbe 1．0 lI】1)在O℃平衡。将要冷冻的胚胎移入1 mol／L的DMSO的液滴里，让其自然沉到液滴底部，重复3次以尽可能地去除HTF。将5肛11 mol／L的DMSO和胚胎一同移入提前预冷的冷冻管中，O℃平衡5 s后，加入45 ul的DAP213，再在O℃平衡5s，将冷冻管装到冷冻管夹直接投入液相液氮罐。第二天将冷冻管从液相液氮罐转入到气相液氮运输罐，存放14 d后放回液相液氮罐。每种品系均留一个冷冻管的胚胎不放入气相液氮运输罐，作为对照。
1．7胚胎复苏
将冷冻管从液相液氮罐中取出，倒出冷冻管里的液氮，在室温卜．放置20s。加入37℃预热的0．25Ino儿蔗糖0．9 rnl，迅速吸取注入10次，将蔗糖和胚胎移到培养皿里，再往冷冻管里加O．25 TI】ol／L蔗糖O．45 IIll，回收胚胎。将形态正常的胚胎在HTF里洗3次以充分吸取冷冻保护液，最后移入HTF液滴里培养，并计数。培养1 h后进行移植。
1．8移植
在移植前一天下午挑出8周龄以上发情期lcR小鼠与结扎的ICR雄性小鼠合笼。第二天挑出有阴栓的雌性小鼠做移植用。移植采用输卵管移植。一般在移植后的第20天分娩，计数。
1．9统计方法
用卡方检验对两组数据进行分析比较，P．<0．05为差异显著。自增压液氮罐
采用玻璃化冷冻的方法。先将l mol／L的DMso在宝温下平衡，DAP2 1 3和冷冻管(NuncCryoTllbe 1．0 lI】1)在O℃平衡。将要冷冻的胚胎移入1 mol／L的DMSO的液滴里，让其自然沉到液滴底部，重复3次以尽可能地去除HTF。将5肛11 mol／L的DMSO和胚胎一同移入提前预冷的冷冻管中，O℃平衡5 s后，加入45 ul的DAP213，再在O℃平衡5s，将冷冻管装到冷冻管夹直接投入液相液氮罐。第二天将冷冻管从液相液氮罐转入到气相液氮运输罐，存放14 d后放回液相液氮罐。每种品系均留一个冷冻管的胚胎不放入气相液氮运输罐，作为对照。
1．7胚胎复苏
将冷冻管从液相液氮罐中取出，倒出冷冻管里的液氮，在室温卜．放置20s。加入37℃预热的0．25Ino儿蔗糖0．9 rnl，迅速吸取注入10次，将蔗糖和胚胎移到培养皿里，再往冷冻管里加O．25 TI】ol／L蔗糖O．45 IIll，回收胚胎。将形态正常的胚胎在HTF里洗3次以充分吸取冷冻保护液，最后移入HTF液滴里培养，并计数。培养1 h后进行移植。
1．8移植
在移植前一天下午挑出8周龄以上发情期lcR小鼠与结扎的ICR雄性小鼠合笼。第二天挑出有阴栓的雌性小鼠做移植用。移植采用输卵管移植。一般在移植后的第20天分娩，计数。
1．9统计方法
用卡方检验对两组数据进行分析比较，P．<0．05为差异显著。自增压液氮罐
