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气相液氮运输罐短期储存胚胎的可行性研究材料和方法(下)

时间:2019-05-21 13:34来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:
1.6胚胎冷冻   自增压液氮罐
采用玻璃化冷冻的方法。先将l mol/L的DMso在宝温下平衡,DAP2 1 3和冷冻管(NuncCryoTllbe 1.0 lI】1)在O℃平衡。将要冷冻的胚胎移入1 mol/L的DMSO的液滴里,让其自然沉到液滴底部,重复3次以尽可能地去除HTF。将5肛11 mol/L的DMSO和胚胎一同移入提前预冷的冷冻管中,O℃平衡5 s后,加入45 ul的DAP213,再在O℃平衡5s,将冷冻管装到冷冻管夹直接投入液相液氮罐。第二天将冷冻管从液相液氮罐转入到气相液氮运输罐,存放14 d后放回液相液氮罐。每种品系均留一个冷冻管的胚胎不放入气相液氮运输罐,作为对照。

1.7胚胎复苏
将冷冻管从液相液氮罐中取出,倒出冷冻管里的液氮,在室温卜.放置20s。加入37℃预热的0.25Ino儿蔗糖0.9 rnl,迅速吸取注入10次,将蔗糖和胚胎移到培养皿里,再往冷冻管里加O.25 TI】ol/L蔗糖O.45 IIll,回收胚胎。将形态正常的胚胎在HTF里洗3次以充分吸取冷冻保护液,最后移入HTF液滴里培养,并计数。培养1 h后进行移植。

1.8移植
在移植前一天下午挑出8周龄以上发情期lcR小鼠与结扎的ICR雄性小鼠合笼。第二天挑出有阴栓的雌性小鼠做移植用。移植采用输卵管移植。一般在移植后的第20天分娩,计数。

1.9统计方法
用卡方检验对两组数据进行分析比较,P.<0.05为差异显著。自增压液氮罐
 

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