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液氮保藏法是目前保存微生物菌种最可靠的方法

时间:2017-10-11 08:48来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:

  液氮罐保藏法是目前保存微生物菌种最可靠的方法,多数国家级菌种保藏单位都采用此法。

  1 准备安培管用于液氮保藏的安培管,要求能耐受温度突然变化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm 的安培瓶。

  2 加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时,则将空安培管塞上棉塞,在压力0.11MPa,温度121℃条件下灭菌15min;若保存霉菌菌丝体则需在安培管内预先加入保护剂,如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液,加入量以能浸没以后加入的菌种块为限,而后再进行高压灭菌。

  3 接入菌种将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液,装入已灭菌的安培管;霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器,从平板内切取菌落圆块,放入含有保护剂的安培管内,然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。

  4 冻结再将已封口的安培管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻,则在细胞内会形成冰的结晶,因而降低存活率。

  5 保藏经冻结至-30℃ 的安培管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内,然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃,液态氮为-196℃。

  6 恢复培养保藏的菌种需要用时,将安培管取出,立即放入38~40℃的水浴中进行急剧解冻,直到全部融化为止。再打开安培管,将内容物移到适宜的培养基上培养。

  此法除了适宜于一般微生物的保藏外,对于一些用冷冻干燥法都难以保藏的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞都可长期保藏,而且不易发生变异。缺点是需要特殊设备。

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