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液氮超低温保藏菌种程序

时间:2020-08-19 14:35来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:
1、容器的选择:使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。 液氮罐

2、检查安培瓶是否渗漏:用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟,冲洗干净,弃去含有蓝色染料的安培瓶,其余的安培瓶备用。

3、打印标签(激光打印)。

4、容器的灭菌:先用蒸馏水漂洗干净安培瓶,再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟,干燥并将打印好的标签放入安培瓶中,略拧紧螺旋盖,再行121℃灭菌30分钟。

5、保藏菌菌龄:处于最大生长量阶段或对数生长期后期。

6、保护剂:选用5-10%的甘油或二甲基亚砜作保护剂。

1)甘油的准备:在121℃灭菌15分钟,2-8℃贮存。甘油一般以两倍最终所需浓度的水溶液保存,然后与同等量的细胞悬液混合。若不用细胞悬液,则以最终所需浓度的水溶液保存。

2)二甲基亚砜:用0.22um的聚四氟乙烯过滤膜过滤除菌。过滤膜预先用甲醇和二甲基亚砜漂洗。无菌的二甲基亚砜以10-15ml装量2-8℃避光保存。

7、分装:在无菌条件下,将细胞悬液(从平板上打下直径为5cm的菌块)分装于安培瓶中,并注入保护剂,拧紧螺旋盖。

8、将安培瓶固定在铝夹上,贴好标签。为了便于取用,一般一个铝夹上仅放一个菌株。

9、将控温系统先预冷到4℃,再将铝夹放入其中。以每分钟1℃降温至-40℃,然后以每分钟10℃降温至-90℃。降温以后,将铝夹转移至处于液氮中的储存器中保存。

10、菌种的复活:将液氮保藏的菌种取出,迅速放入37℃水浴中解冻。一般需2至2.5分钟,等完全解冻后,再及时转接到合适的培养基中培养。液氮罐

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