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冻存在-196℃液氮罐中的细胞复苏方法

时间:2020-06-18 09:58来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:
细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

一、 实验前准备:

1、将水浴锅预热至37℃

2、用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

3、在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。

二、取出冻存管:

1、根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2、从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

三、迅速解冻:

1、迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

2、约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。

四、平衡离心:

用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/min 离心3min

五、制备细胞悬液:

1、吸弃上清液。

2、向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。

六、细胞计数:

细胞浓度以5×105/ml为宜。

七、培养细胞:

将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。

初学者易犯错误:

1、水浴锅未预热或者未预热到37℃。

2、水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。

3、离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。

4、一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。液氮罐

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