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液氮罐冻存样品的方法与注意事项

时间:2017-09-07 09:02来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:

  液氮罐冻存样品的方法 :(以独立样品pc12为例)

  1、选择处于对数生长期的细胞。一般长约为70%-80%即可冻存,细胞数目过少或过多都不宜冻存,因为复苏后细胞生存率会降低;收集细胞24小时前换液一次。

  2、用培养液直接将细胞消化下来,离心,1000转, 5min;

  3、吸去上清,在离心管中加入冻存液,(冻存液配制按照60%已过滤的培养基 + 10%DMSO+ 10%胎牛血清+20%马血清配置冻存液(其中DMSO要自己配置), 4度保存备用。),加入冻存液后吹散计数,控制细胞悬液密度为5*106或1*107左右(不过有人建议其实不必要细胞计数,根据细胞的多少,估计一下一瓶细胞冻存几支就行了,细胞密度高一点比较好,操作时间短,对细胞损伤小。), 细胞悬液以1ml的量分装入冻存管中(每个冻存管添加不超过1-1.5m),在冻存管上标记冻存日期,姓名以及细胞种类。最好选择进口的冻存管;

  4、要严密封口,慢冻过程(1.先将冻存管放入4℃冰箱,约1H。 2.接着置于-20℃冰箱,约40min-1h。 3.置于-80超低温冰箱中放置过夜。 4.置于液氮罐中长期保存。) , 注意将冻存管竖立于合适大小的不锈钢饭盒中,应避免冻存管倒立。

  液氮罐冻存样品的注意事项:

  1、使用DMSO前,不需要进行高压灭菌,它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破华它的分子结构,以至于降低冷冻保护效果。在常温下,DMSO对人体有害,故在配制时最好戴上手套操作。最好使用前将DMSO4度冻一下,对细胞的毒性会减少。

  2、不宜将冻存细胞放置在0℃~-60℃这一温度范围内过久,低温损伤主要发生在这一温度区内,是“危险温区”。

  3、注意定期检查液氮罐内液氮量,及时添加。

  4、多余的冻存液可以4度保存备用。

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