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没有液氮罐如何冻存细胞

时间:2017-09-07 08:59来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:

  没有液氮罐如何冻存细胞?不用液氮罐,在冰箱如何冻存4度/-20度/-70度各放多久啊?

  如果不用液氮罐,可以用-70。我们是这样做的,将细胞转移至冻存管中,在-20放置半小时到一小时左右,预冻。之后放入-70中,我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题,复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过,但是老板说1年半没问题,在国外他试过。

  细胞冻遵循:慢冻速溶的原则。

  还可以拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70,即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则,又比较方便,不用先放-20,因为是慢慢冻进去的,所以能更好的达到梯度冻存。

  实际上,我认为慢冻速溶原则是正确的。

  慢冻是要给DMSO以渗透入细胞的时间,所以我的经验是4度的半小时要保证,之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。

  毛巾包裹法十分新颖,呵呵。不过,从原理上看,确实是值得尝试的好方法,既保证了时间,又省去了搬来搬去的麻烦。

  至于-80度的保存时间,我亲眼所见,半年绝对没有问题。

  在4度的情况下,要看你是什么细胞了,如果是老鼠的细胞可以放1小时左右,其他细胞最多半小时(本人做过试验的);在-20度的情况下,老鼠的可以放1天左右,其他细胞半天,但其状态不是很好了;在-70度的情况下,老鼠的细胞可以放1到2年,在此期间要复苏一次看其生长情况,其他细胞最多一年了!

  1. 选用对数生长期细胞,在收集细胞24小时前换液一次。

  2. 用常规方法将细胞消化下来,按(1~5)×106/ml浓度、悬浮于含有10% DMSO的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分,因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些。

  3. 用吸管吸取细胞悬液,分装于无菌安培管中(没管1ml),严密封口,放入三层纱布小袋,注明细胞名称和冻存时间,便于以后查找。

  4. 冻存 当前已有专用细胞冻存器,能精确地控制冻存温度。在无冻存器的情况下,可用手工方法。从把安培悬液在液氮容器口开始,在30~40min内,下降到液氮表面,在停30min后,直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜,次日将纱布袋缓慢下降至液氮中,历时3分钟。在液氮中可长期保存。 若没有液氮,可存于-80冰箱内,不过注意保存时间,比液氮短,可保存3个月左右。

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