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无细胞百日咳攻击菌的制备及液氮保存方法分析

时间:2019-05-09 10:25来源:未知 作者:班德液氮罐 点击:
【摘 要】为了制备无细胞百日咳效价测定用攻击菌并用液氮进行保存,对此方法进行评价。采用原代攻击菌复苏传代后测定细菌浓度,并用蛋白胨水稀释为27亿个菌/ml,分装冻存管中。放入液氮罐内,并对液氮保存的攻击菌进行相应的检测,用统计软件计算。结果显示,此方法制备的攻击菌与传统的攻击菌无显著性差异,冻后虽攻击菌的毒力有所下降,但都在100~1000/MLD的正常范围内,且冻后0、3、6、9、12月无显著性差异。同批支间差异小,CV<5% 。通过此方法制备的攻击菌稳定性好,试验结果符合《中华人民共和国药典》要求,可用于无细胞百日咳的效价测定。

【关键词】无细胞百日咳攻击菌;液氮保存;方法分析  自增压液氮罐

作为无细胞百日咳效价测定攻击用的菌种,长期以来都是每次试验前现开菌种的方式,这样既麻烦,又浪费菌种,还有可能造成批间的效力试验差异很大。甚至可能因攻击菌不成立,导致试验失败。这样浪费动物、人力、时间。

为此,实验用事先制备攻击菌低温保存的方法来解决这些问题。制备及保存微生物具有容易变异的特性,因此在保藏过程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态,才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力,Mery-man(1956)曾引证在-130℃将无生化活性发生。据此可采用液氮保存攻击菌。自增压液氮罐

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